組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前(qian)15分鐘內配制。每(mei)瓶以(yi)(yi)樣(yang)品稀(xi)釋(shi)(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)(shi)至0.5ml，蓋(gai)好后室溫靜置(zhi)大約10分鐘，同時反復(fu)顛倒/搓動以(yi)(yi)助溶解，其濃度為(wei)(wei)200 U/L，然后做系列倍比稀(xi)釋(shi)(shi)（注：不要直接在板中進(jin)行倍比稀(xi)釋(shi)(shi)），分別配制成(cheng)200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣(yang)品稀(xi)釋(shi)(shi)液(ye)直接作(zuo)為(wei)(wei)空白孔(kong) 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取(qu)0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上(shang)述標準品加入含有(you)0.3ml樣(yang)品稀(xi)釋(shi)(shi)液(ye)的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以(yi)(yi)此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液(ye)A：1×10ml。
5、 檢(jian)測稀釋(shi)液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實驗(yan)過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對(dui)應目的(de)基因的(de)特異引物(wu)（在(zai)PCR反(fan)應中，新(xin)合(he)成的(de)DNA是(shi)(shi)要(yao)(yao)接在(zai)一(yi)小(xiao)段(duan)序列上才(cai)能(neng)繼(ji)續按照模(mo)(mo)板(ban)(ban)DNA復制(zhi)，而不能(neng)從無到(dao)有(you)，憑空合(he)成。這一(yi)小(xiao)段(duan)序列就是(shi)(shi)你(ni)所要(yao)(yao)有(you)設計的(de)引物(wu)。可(ke)以是(shi)(shi)DNA也(ye)可(ke)以是(shi)(shi)RNA，一(yi)般(ban)20多bp，需要(yao)(yao)根據你(ni)的(de)模(mo)(mo)板(ban)(ban)鏈設計。因此，擴增不同的(de)基因需要(yao)(yao)設計不同的(de)引物(wu)）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按(an)以下次序將(jiang)各成分加(jia)入一無(wu)菌0.5ml離心管(guan)中。
10×PCR buffer            ; 5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              ;2μl
Taq酶(mei)（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至  ;             50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整(zheng)好反應程(cheng)序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行(xing)擴增。一(yi)般：在93℃預變性(xing)3-5min，進入循環(huan)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huan)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chan)物放置于4℃待電泳(yong)檢測或(huo)-20℃長(chang)期保存。
4．PCR的電(dian)泳檢測：如在反(fan)(fan)應(ying)管中(zhong)加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反(fan)(fan)應(ying)混合(he)液，以除去(qu)石蠟油；否則，直接取5-10μl電(dian)泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純(chun)化模板所選用的(de)方法對污染(ran)的(de)風險(xian)有極大影響。一般(ban)而言(yan)，只要(yao)能夠得到可靠的(de)結果，純(chun)化的(de)方法越簡(jian)單越好。
３．所有(you)試劑都應該沒有(you)核酸(suan)和核酸(suan)酶的污染。操作(zuo)過(guo)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑(ji)都應該以大體積配制(zhi)，試驗(yan)一下是否滿意(yi)，然后分裝成僅夠一次使用的(de)量(liang)儲存，從而確保實驗(yan)與實驗(yan)之間的(de)連(lian)續性。
６．試劑或樣(yang)品準備過程中(zhong)都要使用一(yi)次性滅菌的塑(su)料(liao)瓶和管子(zi)，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反(fan)應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
[Tyr34]-甲狀旁(pang)腺(xian)激素(7-34) 酰(xian) (牛(niu))酰(xian)酸叔丁酯(zhi)

[Trp4]-Kemptide(S)-1-N-Boc-2-甲基哌

[Tyr8]緩激肽BOC-N-甲基-L-氨酸

[Tyr9]- β-促(cu)黑激素(su) (豬)氫化鋰(li)

α-心鈉素(1-28), human鄰磺(huang)酰

α-促黑(hei)激(ji)素硫代草氨酸酯

β-淀粉樣蛋白(1-42),人(R)-1-N-Boc-2-甲(jia)基(ji)哌(pai)

β-淀粉樣蛋白(bai)(25-35)3,6-二吡(bi)啶羧酸

β-促黑激素，人D-二(er)甲(jia)酰

β-促黑激素，猴(hou)氟-

Ac-垂(chui)體腺苷酸環化酶激活肽-38，人，小鼠，綿羊，豬，大鼠2,5-二

Ac-YVAD-肽核酸(suan)特戊酰基酸(suan)酯

促腎上腺皮質激素（1-10），人間甲酰

促腎上腺皮質激素（1-13），人間氟甲酰

促腎上腺皮質激素（1-16），人氧基-1,1,1-三氟--2-酮

促腎上腺皮質激素（1-17），人N-芐基甘氨酸

促腎上腺皮質激素(1-24), 人對環己酮甲酸酯

促腎上腺皮質激素（1-39），人氫氧化鋇

β-抑制蛋白(bai)2/β休止蛋白(bai)2/β-arrestinPhospho-FoxO3a (Ser294) /FITC  熒光(guang)素(su)標記兔(tu)抗、大、叉頭蛋白(bai)3AIgG100 ul

炭疽桿菌Phospho-FoxO3a (Ser253) /FITC  熒光素標記兔抗、大、叉頭蛋白3AIgG100 ul

腎上腺皮質發育異常蛋白FOXO4/FITC  熒光素標記兔抗、大、叉頭蛋白4IgG100 ul

血管緊張素Ⅱ1A型受體Phospho-FoxO4 (Ser193) /FITC  熒光素標記兔抗、大、叉頭蛋白4IgG100 ul

ABI1/SSH3BP1蛋白phospho-FOXO4 (phospho S197) /FITC  熒光素標記(ji)兔抗、大、叉(cha)頭蛋白4IgG100 ul

酰化組蛋白H1bphospho-FOXO4 (Ser262) /FITC  熒光素標記兔抗、大、叉頭蛋白4IgG500 ul

酸化雄激素受體FOXF1/FITC  熒光素標記叉頭蛋白F1IgG100 ul

多功能DNA修復酶FOXM1/HFH 11/FITC  熒光素標記插頭蛋白M1IgG20 ul

AP2關聯激酶1FoxP1/FITC  熒光(guang)素標記FoxP1（T細胞(bao)轉錄因(yin)子(zi)）IgG100 ul
轉基因植物Bar基因核酸試劑盒廠家磷酸化轉錄因子ERF抗體N6-Benzoyl-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-deoxyadesine中文名：N6-苯甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧腺苷別名：分子式：C38H35N5O6

真核肽鏈釋放因子1抗體N4-Benzoylcytidine中文名：N4-苯甲酰胞苷別名：分子式：C16H17N3O6

真核肽鏈釋放因子3a抗體9-Benzoylcarbazole中文名：9-苯甲酰基咔唑別名：分子式：C19H13

表皮生長因子受體底物15抗體3-Benzoylthiazolidine-2-thione中文名：3-苯甲酰噻唑烷-2-硫酮別名：分子式：C10H9S2

內吞作用輔助蛋白EPN1抗體Betamethasone中文名：倍他米松別名：分子式：C22H29FO5