注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶(mei)標板：一(yi)塊（96孔(kong)）
2、 標準(zhun)品(pin)(pin)(pin)（凍(dong)干(gan)品(pin)(pin)(pin)）： 2瓶，請臨用前15分(fen)鐘(zhong)內(nei)配制。每(mei)瓶以樣品(pin)(pin)(pin)稀釋(shi)(shi)液(ye)稀釋(shi)(shi)至(zhi)0.5ml，蓋好后室溫靜(jing)置大約10分(fen)鐘(zhong)，同(tong)時反復顛倒/搓(cuo)動(dong)以助(zhu)溶(rong)解，其(qi)濃度(du)為(wei)200 U/L，然后做系列倍比稀釋(shi)(shi)（注：不要(yao)直接(jie)在板(ban)中進行倍比稀釋(shi)(shi)），分(fen)別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品(pin)(pin)(pin)稀釋(shi)(shi)液(ye)直接(jie)作(zuo)為(wei)空(kong)白孔 0 U/L。如(ru)配制100 U/L標準(zhun)品(pin)(pin)(pin)：取0.3ml （不要(yao)少于0.3ml ）200 U/L的上述標準(zhun)品(pin)(pin)(pin)加入含有0.3ml樣品(pin)(pin)(pin)稀釋(shi)(shi)液(ye)的Eppendorf管(guan)中，混(hun)勻即可，其(qi)余濃度(du)以此(ci)類(lei)推。
3、 樣品稀(xi)釋液：1×20ml。
4、 檢(jian)測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢(jian)測稀釋液(ye)B：1×10ml。
?
實(shi)驗(yan)過程(cheng)：
一(yi)、試(shi)劑準備
1. DNA模板(ban)
2．對應(ying)目(mu)的(de)(de)基(ji)(ji)因(yin)(yin)的(de)(de)特異(yi)引(yin)物（在PCR反應(ying)中，新(xin)合成的(de)(de)DNA是(shi)要(yao)接在一(yi)小(xiao)段序(xu)列上才能(neng)繼(ji)續按(an)照(zhao)模(mo)板DNA復制，而不能(neng)從無到(dao)有(you)，憑空(kong)合成。這(zhe)一(yi)小(xiao)段序(xu)列就是(shi)你(ni)所要(yao)有(you)設計的(de)(de)引(yin)物。可以是(shi)DNA也可以是(shi)RNA，一(yi)般20多bp，需(xu)要(yao)根據你(ni)的(de)(de)模(mo)板鏈設計。因(yin)(yin)此(ci)，擴增(zeng)不同的(de)(de)基(ji)(ji)因(yin)(yin)需(xu)要(yao)設計不同的(de)(de)引(yin)物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含(han)dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二(er)、操作步驟
1．在冰浴(yu)中，按以下次序將各成分加(jia)入一(yi)無(wu)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）        ;    1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至    ;           50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整(zheng)好反(fan)應(ying)程序。將上述混合液稍加離心，立(li)即(ji)置PCR儀上，執行擴增。一般：在(zai)93℃預變(bian)性3-5min，進入循(xun)環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循(xun)環30-35次，zui后在(zai)72℃ 保(bao)溫(wen)7min。
3．結(jie)束反應，PCR產(chan)物放置于4℃待電泳(yong)檢(jian)測(ce)或-20℃長期保存。
4．PCR的電(dian)(dian)泳檢測(ce)：如在(zai)反(fan)應管中加有石(shi)蠟油，需(xu)用100μlLuFang進行抽提反(fan)應混合(he)液，以除去(qu)石(shi)蠟油；否則(ze)，直接取(qu)5-10μl電(dian)(dian)泳檢測(ce)。
三、注意事項(xiang)
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純(chun)化模(mo)板所選用的方法對污染的風險有極(ji)大(da)影響(xiang)。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jie)果，純(chun)化的方法越簡單越好(hao)。
３．所有(you)試劑都(dou)應該沒有(you)核酸和(he)核酸酶的(de)污染(ran)。操(cao)作(zuo)過程(cheng)中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都(dou)應該以(yi)大(da)體積配制，試驗一下是(shi)否滿意，然(ran)后分裝(zhuang)成僅夠一次使(shi)用的量儲存，從而確保實驗與(yu)實驗之間的連續性。
６．試劑(ji)或樣品準備過程中都要使用一(yi)次(ci)性滅菌的塑料瓶和管子(zi)，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
西索米星（標準品）2-甲氧基煙酸

大觀霉素（標準品(pin)）對溴

5-甲(jia)基(ji)(ji)四氫葉酸3,5-二硝基(ji)(ji)-甲(jia)酸

吉它霉素（標準品）8-溴喹啉

交沙霉素（標準品）2--5-甲

醋酸麥迪霉素（標準品）氨基-基吡唑

依(yi)替米星（標(biao)準品）酸叔丁酯

巴龍霉素（標準品(pin)）原(yuan)甲酸三酯

拉寧（標準(zhun)品）三氟甲基肉桂(gui)酸(suan)

制霉菌素（標準品）2-羥基-溴甲酸

頭孢(bao)噻吩（標準品）甘氨酰鹽酸鹽

肌苷5'-單酸D-鳥氨酸鹽酸鹽

苦玄參苷X（標準品）芐脒鹽酸鹽

豆甾葡萄糖苷(標準品)6-吲哚甲酸

新霉（標準品）6-溴吲哚-2-羧酸

醌式利福平（標準品）5-溴吲哚-2-羧酸酯

甲酰利福霉素SV（標準品）6-甲氧基吲哚-2-羧酸

7－氨基去(qu)酰氧基頭孢烷酸（7-ADCA）（標(biao)準(zhun)品）(R)-哌啶(ding)甲酸酯-L-鹽

β淀粉樣肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)Fibulin 1/FITC  熒光素標記抗“衰老(lao)關(guan)鍵(jian)蛋(dan)白”IgG100 ul

β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16Phospho-FHIT (Tyr114) /FITC  熒光素(su)標(biao)記抗酸(suan)(suan)化脆性組氨酸(suan)(suan)三聯體(ti)IgG500 ul

β淀粉樣肽1-28/β-Amyloid 1-28Fibulin-5/FITC  熒光素標記抗“衰老關鍵蛋白”IgG100 ul

激活素受體2AFLG/FITC  熒光素標記絲聚蛋白/中間絲蛋白IgG20 ul

水通道蛋白5FLIP S/L /FITC  熒光素標記凋亡調節基因之一IgG100 ul

β淀粉樣肽（1-40）FLIPS/FITC  熒光素標記凋亡調節基因之一（短(duan)型）IgG100 ul

β淀粉樣肽（1-42）FN /FITC  熒光素標(biao)記纖維連(lian)結蛋白IgG100 ul

載脂蛋白A1FN/RBITC  紅色熒光素標記纖維連接蛋白IgG100 ul

β-抑制(zhi)蛋白1FOS B/FITC  熒光素標記FosBIgG100 ul
轉基因植物PAT基因核酸試劑盒規格人活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒英文名稱：Human Activin A，ACV-A ELISA Kit*

人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒英文名稱：Human Troponin Ⅰ，Tn-Ⅰ ELISA Kit*

人肌鈣蛋白T(Tn-T)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Troponin T，Tn-T ELISA Kit進口/原裝

人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myoglobin，MYO/MB ELISA Kit進口/分裝

人肌腱蛋白R(TN-R)ELISA試劑盒英文名稱：Human tenascin-R,TN-R ELISA Kit*

人肌球蛋白(MYS)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myosin，MYS ELISA Kit進口/原裝小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠肺炎病毒（PVM）ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
檢測(ce)步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴(kuo)增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。